NADPH oxidase--a specialized enzyme complex for the formation of active oxygen metabolites

Article in Russian

Kliubin IV, Gamalei IA.

рунете я ее так и не нашел

ничем не смог Вам помочь....

Но может хоть на английском?

Когда это ты уже успел прейти на "Вы"?

Inducción de NADPH oxidasa por acción de la lipoproteína oxidada de baja densidad en células humanas endoteliales

El superóxido (O2.) desempeña un papel importante en la génesis de la placa ateromatosa porque reduce la biodisponibilidad de óxido nítrico (.NO) y la formación de peroxinitrito (ONOO.). Además estimula la adhesión de moléculas de expresión y oxida la LDL a su forma oxidada o oxLDL.
Tanto en los leucocitos como en las células endoteliales, la NADPH oxidasa constituye la mayor fuente de O2. . La enzima está constituida por 2 subunidades gp91phox y p22phox ubicadas en la membrana plasmática y unidades citosólicas p67phox y p47phox necesarias para la activación del complejo enzimático. En el endotelio, el complejo enzimático prefiere el sustrato NADH sobre NADPH y libera O2. en menor grado.
En este estudio, los autores determinaron las secuencias ADN de diferentes NADPH oxidasas. Asimismo, se evaluó el efecto proaterosclerótico de la oxLDL sobre la expresión de NADPH oxidasa y generación de O2. en células endoteliales humanas.
Para aportar nueva evidencia de que los hallazgos in vitro, también ocurren in vivo, se determinaron también los efectos de los inhibidores de la HMG-CoA reductasa sobre la expresión vascular de NADPH oxidasa.

Métodos
Se cultivaron células endoteliales de cordón umbilical (HUVEC). Se obtuvieron leucocitos purificados que fueron utilizados para preparación de RNA y determinación citocromo c. Se obtuvieron segmentos sobrantes de arteria mamaria interna de 14 pacientes sometidos a cirugía de revascularización coronaria. Seis pacientes consecutivos que recibían estatinas fueron comparados con 8 pacientes sin tratamiento de estatinas. Los fragmentos de ADN fueron amplificados por técnica de reacción en cadena de la polimerasa PCR.

Resultados
En contraste con la LDL, la oxLDL induce la formación de O2. en el cultivo de células endoteliales y en segmentos intactos de aorta. Diversas experiencias sugieren que la NADPH oxidasa es la fuente de O2.. También se observó que la inducción de oxLDL mediada por la expresión de la subunidad gp91phox de NADPH oxidasa, se acompañaba de liberación de O2. endotelial en una curva de tiempo similar. Por lo tanto, la inducción de la expresión de gp91phox por el estímulo proaterosclerótico de oxLDL puede constituir la base molecular en la elevación de O2.. La información de los autores sugiere que este es un círculo vicioso proaterosclerótico que involucra la expresión endotelial de gp91phox, la liberación de O2. y la modificación oxidativa de la LDL en oxLDL, que a su vez aumenta aún más la expresión de gp91phox.
Debido a que se sabe que niveles elevados de LDL producen un aumento del ingreso de LDL en la capa íntima vascular, la formación constitutiva de O2. por el endotelio vascular producirá una mayor modificación oxidativa de la LDL. De acuerdo con esta premisa, las terapias hipolipemiantes con estatinas o inhibidores de la HMG-CoA reductasa, reducirían la producción de oxLDL. Como consecuencia de esto, debe esperarse una menor expresión vascular de gp91phox. Esta hipótesis ha sido confirmada en este estudio porque se observó la disminución de la regulación en la expresión de gp91phox en las arterias mamarias de los pacientes tratados con inhibidores de la HMG-CoA reductasa.

Rueckscholss U, et al. Martin Luther University, University of Wuerzburg, Germany, and University of Basel, Switzerland. Circulation 2001;104:1767-72.

Aumento de la producción de radicales libres en la hipertensión debido al incremento de la expresión de la subunidad p22fox de NADPH oxidasa en las líneas celulares de linfoblastos

Las especies reactivas del oxígeno o radicales libres del oxígeno (RLO) pueden participar en la fisiopatología de la hipertensión al reaccionar con las especies derivadas del óxido nítrico (.NO) endotelial. Esto produce disfunción endotelial y el aumento de la presión arterial. La NADPH oxidasa, que se origina principalmente en los fagocitos, es considerada como la mayor fuente de RLO en la hipertensión. Esta enzima es un complejo proteico con una porción unida a la membrana celular (el citocromo b558), compuesto por los hemes gp91phox y p22phox, y una flavina-adenina dinucleótido. La porción membranosa constituye el núcleo catalítico que se activa cuando se une a los componentes citosólicos p40phox, p47phox y p67phox. Estos componentes están íntimamente asociados con la proteína G Rac2, que permite la translocación de aquellos hacia la membrana.
Los objetivos de este trabajo fueron: medir la producción, tanto basal como estimulada, de RLO en las líneas celulares de linfoblastos de individuos normo e hipertensos y demostrar que la NADPH oxidasa es la fuente responsable de RLO.

Métodos
Se obtuvieron linfocitos de individuos hipertensos y de controles. Estas células fueron inmortalizadas por ingeniería genética. La detección de RLO fue resaltada con un análogo de cipiridina luciferina. Los anticuerpos policlonales de los diferentes componentes de NADPH oxidasa se determinaron por Western blot.

Resultados
Los autores demostraron un aumento de la producción de RLO en los linfoblastos provenientes de los pacientes hipertensos, originados por la NADPH oxidasa. Se observó un aumento de la expresión de p22phox en los linfoblastos de sujetos hipertensos que puede ser responsable de parte del aumento de los RLO.

Pettit AI, et al. Royal United Hospital Bath, University of Leicester UK. J Hypert 2002; 20: 677-83.

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